pas assez de chromosomes en metaphase

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Re: pas assez de chromosomes en metaphase

Message par sabrina le Mer 17 Mar - 23:39

bonsoir,ça yest j'ai eu mes fameux chromosomes! merci pour le tuyau.
maintenant je m'attaque aux dénaturations!
je veux essayer la dénaturation thermique qui me parait plus simple à maitriser que la G quest ce que vous en penser?

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Re: pas assez de chromosomes en metaphase

Message par sabrina le Mer 10 Mar - 23:15

merci beaucoup.
J'ai pris note de vos remarques.
je vous tiens au courant des resultats.

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Re: pas assez de chromosomes en metaphase

Message par Admin le Mer 10 Mar - 13:08

avez-vous fait une préfixation entre le choc et la 1ere fixation?
après 12min de choc KCl à 37°C on ajoute 8 gouttes de fixateur à température ambiante, on attend 1-2min puis on centrifuge. on aspire le surnageant puis là on fait la 1ere fixation avec du fixateur froid.
sinon peut-être le temps de colchicine ( on l'achète chez sigma)et là on est à 30min de colchicine.
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Re: pas assez de chromosomes en metaphase

Message par sabrina le Mar 9 Mar - 22:18

bonjour,
j'ai lancer deux cultures avec synchroset,une de 72h et une de 96h.
toujours pas de bons resultats! pas assez de metaphases et en plus les chromosomes étaient hypercondensés Sad la deuxieme tube etait plus riche.
D'aprés une collegue ça doit etre la colchicine qui n'est pas de bonne qualité...HELP!

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Re: pas assez de chromosomes en metaphase

Message par sabrina le Mar 23 Fév - 12:58

merci beaucoup de m'avoir répondu.
J'ai pu me procurer le synchroset . j'espere que j'aurai de bons résultats cette fois ci.
Je vous donnerai des nouvelles

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Re: pas assez de chromosomes en metaphase

Message par Admin le Dim 21 Fév - 16:10

bonjour,
dans notre labo on utilise aussi le milieu d'euroclone mais avec le kit de synchronisation.
sans synchronisation, on mettait les sangs en culture par ex le lundi après-midi et on ajoutait la démécol (= colchicine) le jeudi matin, pendant 1h30. Puis la technique d'arrêt classique (choc, préfix, fixations et étalement).
pendant les 72h de culture, on agitait par 2 ou 3 retournements les tubes la veille de l'arrêt pour remettre en suspension le sang qui s'était déposé au fond du tube. l'incubation se faisant sur portoir incliné ( les tubes ne sont pas debout dans l'étuve!) pour avoir une surface d'échange entre le milieu de culture et le sang la plus grand possible.
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pas assez de chromosomes en metaphase

Message par sabrina le Sam 20 Fév - 15:01

bonjour;
je remets en place la technique du caryotype dans notre labo et je fais des essais.j'ai utilisé le chromosome kit p d'euroclone (milieu préparé).
Aprés 72 H j'ai eu beaucoup de cellules MAIS avec un noyau interphasique donc tres peu de mitose!!!!
je crois que je dois changer le temps d'incubation.
Qu'est ce que vous en pensez?????
si c'est ça le problème;dois rajouter 24h OU au contraire reduire de 24hh.
SVP j'attends votre réponse avec impatiente!!!!!!!!

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