CONGELATION des cellules ammiotiques

Une petite question: congelez vous vos cellules de LA qui sont prélevés pour SAECHO? si oui ,votre technique nous interesse !!!!( nous ,on congele mais nous avons du " mal " lors de la decongelation!!)merci a tous technicienne du havre

Bonjour
Nous congelons en DMSO de la facon suivante:trypsiner 1 flacon de culture à confluence,transvaser ds 1 tub,centrifuger 5mn à 1200 tr,rincer 2fois avec du RPMI,reprendre le culot avec 0,5 ml de SVF,transvaser ds 1 cryotube,laisser attendre ds la glace pilée.Préparer sol de DMSO à 20% ds RPMI,laisser attendre ds la glace pilée (DMSO toxique àT° ambiante)ajouter 0,5 ml de DMSO à 0,5 ml de la préparation cellulaire en restan t le +possible ds la glace,mettre à-80°c pd 1 nuit puis ds l'azote liquide.
Décongélation:ds BM à 37°c très rapidement 1 à 3 secondes ,transférer ds 1 tub,ajouter 10 ml de RPMI à 10% de SVF 0 37°C,centifuger 5mn à 1200tr,remettre 10ml de rpmi,recentrifuger 5mn à 1200tr,ensemencer sur falcon comme une culture normal.Bonne journée

bonjour,merci de votre reponse rapide,nous utilisons aussi DMSO mais notre technique est vraiment differente de la votre !! par contre nous laissons les micro tubes dans congelateur -20°c pdt au moins un mois!!!!avant de transferer dans - 80°c( nous n avons plus d azote liquide,trop complique a gerer dans les commandes et approvisionnement!!)est ce la temperature (-20°)qui "tue" mes cellules ? nous travaillons aussi le DMSO a temperature ambiante ! est ce que d autres labos ont des "soucis" ou des " infos" pour nous aider ????
merci d avance( nous essayerons votre technique !!) le havre