CONGELATION des cellules ammiotiques

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CONGELATION des cellules ammiotiques

Message par picot le Mar 30 Mar - 12:53

Une petite question: congelez vous vos cellules de LA qui sont prélevés pour SAECHO? si oui ,votre technique nous interesse !!!!( nous ,on congele mais nous avons du " mal " lors de la decongelation!!)merci a tous technicienne du havre Question

picot

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Re: CONGELATION des cellules ammiotiques

Message par technicienne le Mer 31 Mar - 14:48

Bonjour
Nous congelons en DMSO de la facon suivante:trypsiner 1 flacon de culture à confluence,transvaser ds 1 tub,centrifuger 5mn à 1200 tr,rincer 2fois avec du RPMI,reprendre le culot avec 0,5 ml de SVF,transvaser ds 1 cryotube,laisser attendre ds la glace pilée.Préparer sol de DMSO à 20% ds RPMI,laisser attendre ds la glace pilée (DMSO toxique àT° ambiante)ajouter 0,5 ml de DMSO à 0,5 ml de la préparation cellulaire en restan t le +possible ds la glace,mettre à-80°c pd 1 nuit puis ds l'azote liquide.
Décongélation:ds BM à 37°c très rapidement 1 à 3 secondes ,transférer ds 1 tub,ajouter 10 ml de RPMI à 10% de SVF 0 37°C,centifuger 5mn à 1200tr,remettre 10ml de rpmi,recentrifuger 5mn à 1200tr,ensemencer sur falcon comme une culture normal.Bonne journée

technicienne

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congelation

Message par picot le Jeu 1 Avr - 10:29

bonjour,merci de votre reponse rapide,nous utilisons aussi DMSO mais notre technique est vraiment differente de la votre !! par contre nous laissons les micro tubes dans congelateur -20°c pdt au moins un mois!!!!avant de transferer dans - 80°c( nous n avons plus d azote liquide,trop complique a gerer dans les commandes et approvisionnement!!)est ce la temperature (-20°)qui "tue" mes cellules ? nous travaillons aussi le DMSO a temperature ambiante ! est ce que d autres labos ont des "soucis" ou des " infos" pour nous aider ????
merci d avance( nous essayerons votre technique !!) le havre alien

picot

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Re: CONGELATION des cellules ammiotiques

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