AU SECOURS UNE TECHNIQUE POUR LES PLACENTOS

bonjour marseille !j espere que vous aurez d aussi beau resultat que nous avec notre techn !!!
tout d abord,le prelevement est place dans un milieu de transport(rpmi)de base ,des son arrivée au labo on le traite aussitot ,on ne le laisse pas dans un milieu riche(ammiomax ou autre ) !!! on le rince juste avec un milieu de culture(ammiomax ou ammiochrome)l ors du tri pour nettoyer les villositées.pour secher les lames, une simple etuve a 37 ° suffit. bon courage

bonjour re questions pour votre technique placentos!!! au prochain prelevement j essaie la votre!!!!
1-qu utilisez vous comme milieu de prelevement?amniomax ou chang? nous avons l amniomax serait ce du a une difference de composition entre ces milieux?
2-quand vous sechez les lames a l etuve s agit t il d une etuve a 37 degrés +co2 ou juste 37 degrés?

en tout cas 16 mitoses sur 3 lames ca fait rêver!!!!!!si si!!!!!
merci de votre gentillesse en tout cas!!!!

bonjour re questions pour votre technique placentos!!! au prochain prelevement j essaie la votre!!!!
1-qu utilisez vous comme milieu de prelevement?amniomax ou chang? nous avons l amniomax serait ce du a une difference de composition entre ces milieux?
2-quand vous sechez les lames a l etuve s agit t il d une etuve a 37 degrés +co2 ou juste 37 degrés?

en tout cas 16 mitoses sur 2 lames ca fait rêver!!!!!!si si!!!!!
merci de votre gentillesse en tout cas!!!!

il faut essayer la notre !!!! aujourd hui deux trophos :premier :16 mitoses sur deux lames et l autre 16 mitoses sur trois lames ;toutes les mitoses prises sont classées et sans soucis!!!!mais c est vrai que le prelevement doit etre de bonne qualité !!!(50mg ,c est bien!)le direct est fait le jour meme du prelevement( si arrivée a 10 h du mat ,etalé a 12h30 ,denat a 13h30 et lecture a 15h30 !)

apres avoir tenté la derniere methode en tube de bordeaux sur un prelevement de villosites..apres etalement et bcp de temps passé dessus....AUCUNE MITOSE...
besoin de quelques precisions:traitez vous le prelevement des que vous l avez ou attendez vous le lendemain en mettant le prelevement ds du milieu?
pour la methode avec les differents degres d alcool avant etalement est vraiment indispensable?a quoi servent ces differents bains ?
merci pour vos reponses!!! amicalement!

un grand merci chers collegues pour toutes ces infos et de nous faire partager votre savoir faire!!!!plus qu a attendre de nouveaux prelevements pour tester ces differentes recettes!!!!

bonjour,
Voici notre technique Bordelaise qui marche trés bien.
- mettre les villosités dans un tube de 15 ml + 10 ml de milieu RPMI
- ajouter 200µl de colcémid 10µg/ml : 1h30 à 37°C tube couché
- retirer le surnageant puis ajouter 10 ml de choc : 30 min température ambiante
- retirer le surnageant, ajouter 10 ml de fixateur (carnoy) : 20 min
- retirer le surnageant, ajouter 10 ml de fixateur : 5 min
- placer les villosités dans un verre de montre (bien éliminer le fixateur) et ajouter 8 à 10 gouttes d'acide acétique 50% pendant 10 minutes en "trifouillant" les villosités avec des aiguilles toutes les 3 min
- prendre le surnageant et déposer 1 à 2 gouttes / lame, placée sur un étaleur à 37°C
- lorsque la lame est sèche, on peut passer à la coloration

voilà, il s'agit d'une technique différente en espérant qu'elle vous aidera
bon courage

le carnoy : acide acetique (1 vol) plus alcool methylique absolu(3 vol ) extempo
le dispersant : acide acetique 60% extempo( 10 ml )
les lames sont etalees sur paillasse a temperature ambiante.on etale 4 lames en deposant delicatement 2 gouttes de suspension ,puis on rajoute du dispersant dans la suspension et on reetale 4 lames(concentration differente)ensuite on place le plateau dans une etuve 37°bien a plat pour eviter les gouttes de migrer!on laisse secher 2 h puis on denature.un tropho arrive le matin est repondu dans l apres midi. si tropho arrive trop tard on etale dans la journee et on denature le lendemain ! bon essai ( les mitose seront dans les couronnes externes,en sechant les cellules vont faire des couronnes les dernieres auront des grosses cellules et les mitoses!)

J AURAIS BESOIN DE QQ PRECISIONS?
MDR
QU APPELEZ VOUS CARNOY?EST CE UN TERME DU HAVRE,?LOL
DISPERSANT? EST CE ACIDE ACETIQUE A 50%?
ET OU ETALEZ VOUS VOS LAMES?VOUS VERSEZ DES GOUTTES SUR LES LAMES A L AIR LIBRE ET ENSUITE VOUS LES TRANSFEREZ A L ETUVE 37? ET VOUS SECHEZ COMBIEN DE TEMPS;,?
ENCORE MERCI POUR VOTRE REPONSE RAPIDE!! CA FAIT PLAISIR!!
PAR CONTRE ON NE PEUT PAS VOUS AIDER POUR VOTRE QUESTION ....NE PRATIQUONS PAS....DESOLEES....

bonjour,voici notre technique du havre,nous arrivons toujours a repondre sur un direct si la quantite de materiel est correct!!si vous avez une technique de budr sur fibro elle serai bien venue dans le nord !! merci bon courage






EXAMEN DIRECT

- Ajouter stérilement 8 gouttes de pastette de Colchicine diluée dans le PBS dans la boite de Pétri et incuber 1 heure à 37°C dans l’étuve à CO2.
- Le travail qui suit n’est plus stérile.
- A la fin du temps de colchicine, aspirer le surnageant délicatement à la pastette.
- Ajouter doucement 7 ml de citrate 0,8% à température ambiante et incuber 10 min à 37°C.
- Préparer le Carnoy acétique.
- Retirer le surnageant à la pastette et ajouter délicatement 7 ml de carnoy acétique. Laisser agir 10 min à température ambiante.
- Retirer le surnageant à la pastette et refaire 2 fixations de 10 min avec 7 ml de carnoy acétique.
- Préparer le dispersant.
- Retirer le surnageant à la pastette et ajouter 6 à 7 ml d’alcool à 90°. Laisser agir 2 min.
- Aspirer le surnageant et ajouter 6 à 7 ml d’alcool à 70°. Laisser agir 2min.
- Aspirer le surnageant et ajouter 6 à 7 ml d’alcool à 50°. Laisser agir 2min.
- Aspirer le surnageant et ajouter 6 à 7 ml d’alcool à 30°. Laisser agir 2min.
- Aspirer le surnageant et faire 2 bains de 3 min avec 6 à 7 ml d’eau distillée.
- Aspirer le surnageant et ajouter 10 gouttes de dispersant en penchant la boite pour ramener les villosités sur le bord.
- Laisser agir pendant 8 min.
- A l’aide de deux aiguilles roses, disperser les villosités. Si il y a beaucoup de matériel, ajouter quelques gouttes de dispersant.
- Préparer 4 à 5 lames et déposer 2 gouttes par lame.
- Ajouter quelques gouttes (7- de dispersant. Déposer à nouveau 2 gouttes sur 4-5 lames.
- Sécher les lames à l’étuve à 37°C et procéder à la dénaturation en Earle jaune le jour même (PTC 399).

BONJOUR AURIEZ VOUS CHERS COLLEGUES UNE TECHNIQUE QUI MARCHE BIEN POUR ARRIVER A OBTENIR DES MITOSES EN EXAMEN DIRECT....(CE QUE NOUS N ARRIVONS PAS!!) AVEC COLLAGENASE OU PAS....
EST IL POSSIBLE D AVOIR UNE TECHNIQUE DETAILLEE DEPUIS LA RECEPTION DU PRELEVEMENT A LA DENAT....MERCI BEAUCOUP POUR VOTRE AIDE....