Quantité de colchicine pour le sang

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Re: Quantité de colchicine pour le sang

Message par pitchoune le Mer 23 Nov - 15:42

merci pour votre réponse. Mais alors vous mettez 100 ul pour 5 ml de milieu. Nous au final on a 10 ml de milieu. Donc les 200 ul de colchi sont peut être appropriés. Mais il est vrai qu'une heure et demi d'incubation est peut-être trop long.
On avait essayé le milieu tout prêt (euroclone) mais notre milieu donnait de meilleurs résultats ou voir equivalents.

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Re: Quantité de colchicine pour le sang

Message par Admin le Mer 23 Nov - 15:17

bonjour,
nous utilisons de la démécolcine (chez sigma) même concentration mais on ne met que 100µL pendant 30 min.
on a fait des tests quand on est passé à la synchronisation ( même kit que vous) et il n'y avait pas de grande différence pour le temps de démécol, et même, moins c'est long, plus c'est joli.
mais nous avons un souci avec cette synchro: il nous reste des mitoses à tous les stades, alors que synchronisées elles devraient être au même stade, et pour moi, les chromosomes devraient être plus longs...
on utillise leur milieu de culture et on met 0.4mL de sang dans 5 mL de milieu.

voilà, j'espère que cela pourra vous aider! Cool
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Quantité de colchicine pour le sang

Message par pitchoune le Mer 23 Nov - 12:27

Bonjour tout le monde ! Very Happy

On applique une technique dans notre labo depuis pas mal de temps ou l'on utilise pour le sang du milieu M199 (8 ml par tube), sérum 2ml, phyto et héparine. et 560 ul de sang.
On utilise le kit synchroset d'euroclone.
Pour la colchicine (10ug/ml) , nous mettons 200 ul par tube pendant 1h30, à 37°C.

cette quantité vous semble t elle correcte ou excessive ?
Les lames ne sont pas jolies depuis un moment, et nous remettons en cause plusieurs paramètres dont la colchicine. study

Merci pour votre aide.

Myri

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